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膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

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产品编号
BB-3111
数量
-
+
1
产品描述

 

注:
● 蛋白提取液: 含多种有效成分,可以充分释放膜蛋白。提取液中已含磷酸酶抑制剂混合物。
● 蛋白酶抑制剂混合物:包含7种独立的蛋白酶抑制剂,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64、EDTA。
注意:
1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件:
蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存;
蛋白提取液2-8℃保存。
有效期:
一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
哺乳动物跨膜蛋白承担各种生物功能,在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套,因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构,因而妨碍了膜蛋白的功能研究。
我公司膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂,适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便,可在1 小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
产品特点:
1、使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3、含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4、紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. Western 实验内参可以选用Tubulin、Na-K ATPase。
A. 细胞蛋白提取
1. 取 5-10×106 个以上细胞①,在4℃,500g 条件下离心2-3 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞样品中加入 200μl 冷的试剂 A,2ul 蛋白酶抑制剂混合物,2ul 蛋白稳定剂,高速涡旋振荡15 秒,置冰上10-15 分钟。
4. 再次高速涡旋振荡 5 秒,然后在4℃,13000×g 条件下离心5 分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,37℃水浴5-10 分钟,37℃下②2000g离心5 分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),下层约为20μl。
6. 收集上层,即为胞浆蛋白③。
7. 用 150-200μl 冰冷的试剂B 稀释下层相,混匀后冰浴2min,37℃水浴5-10 分钟,37℃下②2000g 离心5 分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),下层相约为20μl。
8. 按步骤 7 再次抽提下层相(此步骤可以选做)。
9. 用 80-200μl 冰冷的试剂C 稀释下层相,即得膜蛋白。
10. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
注:
① 细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。由于膜蛋白含量较少,需要较多的细胞才能保证得率。
② 必需保证在37℃左右下离心,至少确保30℃以上。无可控温的离心机时,用常温的离心机在室温离心即可,适当缩短离心时间至2-3 分钟。
③ 用BCA 法进行蛋白定量。
④ 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
B.组织蛋白提取
1. 取适量组织样本剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5 分钟,小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在 4℃,500g 条件下离心2-3 分钟,弃上清。
3. 按照细胞蛋白的提取方法的第 3 步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
使用本产品发表的部分新文献:
● 李素芬, 杨鹰. 不同浓度瘦素对人胚胎绒毛滋养细胞膜胰岛素受体磷酸化的抑制作用
第三军医大学学报, 2010,32(23): 2530-2532.
● 何鸿保 孙浩等. 5-Aza-CdR 对肾细胞癌Caki-1 细胞生长及E-钙黏蛋白基因表达的影响
江苏大学学报, 2011 年01 期
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