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BCA蛋白定量试剂盒

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产品编号
BB-3401
数量
-
+
1
产品描述

 

储存条件:
BCA 试剂室温保存。蛋白标准-20℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。BCA 法快速灵敏、稳定可靠,对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中,常用浓度的去垢剂SDS,Triton X-100,Tween 不影响检测结果,但受螯合剂(EDTA,EGTA)、还原剂(DTT,巯基乙醇)和脂类的影响。实验中,若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高,可用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 水
● 涡旋振荡器 ● 分光光度计或酶标仪
使用方法:
使用注意事项:
1. 在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或 37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。
2. 因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,所以除非精确控制显色反应的时间和温度,否则如需精确测定,每次测定都需重做标准曲线。若需得到更为精确的蛋白浓度结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
3. 若测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化,原因可能是样品中含有严重干扰BCA 法测定蛋白浓度的物质。BCA 蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性,参见附件BCA 蛋白浓度测定兼容性表。
4. 试剂 A 与试剂B 用应密闭保存。
5. 当试剂 A 和B 混合时可能会有浑浊,但混匀后就会消失。
6. 使用温箱孵育时,应注意防止因水份蒸发影响检测结果。
A. 96 孔酶标板测定:
1. BCA 工作液配制。根据样品数量,按50 体积BCA 试剂A 加1 体积BCA 试剂B(50:1)配制适量BCA 工作液,充分混匀。
2. 蛋白标准工作液配制:根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5 倍稀释,配成1mg/ml 的工作液。
3. 标准曲线绘制。取一块酶标板,按以下表格数据加入试剂:
孔号                  0 1   2    3   4   5   6   7
蛋白标准工作液(μl) 0 1   2    4   8   12  16 20
去离子水(μl)      20 19  18  16  12   8   4   0
BCA 工作液(μl)   200 200 200 200 200 200 200 200
对应的蛋白含量(μg)0  1   2   4    8  12  16  20
4. 振荡混匀后,37℃放置30 分钟。
5. 用酶标仪测定 A562,以不含BSA 的光吸收值为空白对照。
6. 以蛋白含量(μg)为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准曲线。
7. 样品测定:将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度,取20μl 样品,加入
200μl BCA 工作液,混匀后37℃放置30 分钟,然后以0 号孔为对照,测定样品吸收值A562。
8. 根据测得的吸收值,在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
9. 计算蛋白浓度:以查得的蛋白含量除以样品体积20μl,再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
B.比色皿测定
按照比色皿规格,与以上方法相同,适当按比例增加各溶液体积即可。
使用本产品发表的部分新文献:
● Lei Hua, Wei-Yan Qi et al. Highly oxygenated stigmastane-type steroids from the aerial
parts of Vernonia anthelmintica Willd
Steroids 2012.3 (IF=3.106)
● Junhan Liu et al. Effects of Light Intensity on the Growth and Lipid Accumulation of
Microalga Scenedesmus sp. 11-1 Under Nitrogen Limitation
Applied Biochemistry and Biotechnology 2012 Mar. Vol. 166 (IF=1.879)
● Li Juan Yang et al. Antiosteoporotic compounds from seeds of Cuscuta chinensis
Journal of Ethnopharmacology 2011 Volume 135, Issue 2, Pages 553-560 (IF=2.466)
● Lei Zhang et al. Emulsified Isoflurane Preconditioning Protects Against Liver and
Lung Injury in Rat Model of Hemorrhagic Shock
Journal of Surgical Research 2010 Sep 8. (IF=2.239)
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