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产品描述
注：
● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin
A、Bestatin、E-64、EDTA。
注意：
1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件：
蛋白酶抑制剂-20℃保存；磷酸酶抑制剂2-8℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：
一年。
注意事项：
● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管
底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清
洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介：
我公司膜蛋白/胞浆蛋白/核蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中分步提取膜蛋白/胞浆蛋白/核蛋白。提取过程简单方便，可在1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
产品特点：
1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱，冰盒
使用方法：
使用注意事项：
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
蛋白提取步骤：
1. 提取液制备：每 400ul 冷的蛋白提取液A/B/D 中加入分别加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul 磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞①，在4℃，1000rpm 条件下离心5-10 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，用细胞刮刀收集细胞。（组织样本50-100mg 剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5 分钟，小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。在4℃，500g 条件下离心2-3 分钟，弃上清。）
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞，使细胞完全破裂。
5. 在 4℃，1000g 条件下离心5 分钟。
6. 快速将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管，在沉淀中加入200μl 冷的提取液
B，高速涡旋振荡15 秒。
7. 将混匀的提取液 B 置冰上40 分钟，每隔10 分钟高速涡旋振荡15 秒。
8. 在 4℃，16000×g 条件下离心10 分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
9. 在步骤 6 中所得到的上清（I）中加入10ul 提取液C，充分混匀。37℃水浴10
分钟。
10. 37℃下② 1000g 离心3 分钟，此时溶液分为两层（对着光线看），上层是胞浆蛋白部分，下层是膜蛋白部分约为40-50μl。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
12. 用 80-200μl 冰冷的提取液D 稀释步骤10 中的下层部分，即得膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
注：
① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心
机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2-3 分钟。
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。
④ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
上一个
叶绿体提取试剂盒
下一个
无
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