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Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒
产品组成:
产品编号 |
BB-4101-1 |
BB-4101-2 |
BB-4101-3 |
原货号 |
401001 |
401002 |
401003 |
规格 |
20 assays |
50 assays |
100 assays |
Annexin V-FITC染色液 |
100 μL |
250 μL |
500 μL |
Propidium Iodide染色液 |
200 μL |
500 μL |
1000 μL |
Annexin V结合液 |
20 mL |
40 mL |
80mL |
使用说明书 |
1 |
1 |
1 |
储存条件:
2-8℃避光保存。长期保存于-20℃避光。
有效期:
一年。
注意事项:
● 请在使用前仔细阅读并参考该说明书。
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● Annexin V-FITC和Propidium iodide 是光敏物质,请注意避光。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
产品背景:
细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。
AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
检测原理:
用标记了FITC的AnnexinⅤ作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤,坏死的细胞会结合Annexin V-FITC。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的,Propidium iodide(PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。将AnnexinⅤ与PI匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与Annexin V-FITC 和PI 结合显色,而PI 则被排除在活细胞(FITC 阴性)和早期凋亡细胞(FITC 阳性)之外。在没有巨噬细胞的情况下,凋亡的最后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体,从而使凋亡晚期的细胞也同时被FITC 和PI 结合染色呈现双阳性。
在双变量流式细胞仪的散点图上,左下象限显示活细胞,为(FITC-/PI-);右上象限是非活细胞,即坏死细胞,为(FITC+ /PI+ );而右下象限为凋亡细胞,显现(FITC+ /PI-)。(图1)
我公司Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒可以方便快捷的检测凋亡细胞,使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
产品特点:
● 方便:可用流式细胞仪或荧光显微镜检测;
● 快速:1小时内即可完成实验;
● 准确:能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,并计数各群细胞的比例。
检测方法:
流式细胞仪或荧光显微镜
样本类型:
● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头
● 离心机 ● 流式细胞仪或荧光显微镜
使用方法:
样品染色:
1、 离心收集悬浮细胞。离心机300g,2-8°C,离心时间5min,弃培养基。(贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化后离心,收集细胞。胰酶消化时间不宜过长,以防引起假阳性)。
2、 用冷PBS洗涤细胞两次。(300g,2-8°C,离心时间5min收集细胞)。
3、 用400ul 1X Annexin V结合液悬浮细胞,浓度大约为1 X 106 cells/ml。
4、 在细胞悬浮液中加入5ul Annexin V-FITC染色液,轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟。
5、 加入10ul PI染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育5分钟。
6、 立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
流式细胞仪分析:
经处理过的细胞此时可以在流式细胞仪上分析。激发波长为488nm。
按照常规的流式凋亡检测的操作即可。 Annexin V-FITC的绿色荧光信号可以通过FL1(FITC接收器)通道检测;PI红色荧光在620nm,通过FL2(Propidium iodide接收器)通道或FL3通道检测。
注:具体流式设置按常规方法即可。也可联系本公司索取供参考的详细步骤。
荧光显微镜观察:
1. 滴加30-50ul用Annexin V-FITC/PI双染的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞。
注:对于贴壁细胞,可以象悬浮细胞那样染色后, 滴一滴细胞悬液于载玻片上,用盖玻片盖上细胞,荧光显微镜下观察。也可直接用盖玻片培养细胞并诱导细胞凋亡。根据盖玻片大小,置于24孔或12孔细胞培养板内培养,然后诱导细胞凋亡。细胞染色在细胞培养板内进行。先用PBS冲洗两次,加入400μl Annexin V结合液于孔中。再加入5μl Annexin V-FITC染色液与10μ
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