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核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒

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产品编号
BB-3112
数量
-
+
1
产品描述

 

注:
● 蛋白提取液: 含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
提取液中已含磷酸酶抑制剂混合物。
● 蛋白酶抑制剂混合物:包含7种独立的蛋白酶抑制剂,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64、EDTA。
注意:
1、 蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件:
蛋白提取液2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期:
一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
我公司核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取核蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便,可在1 小时内完成。制备的核蛋白和胞浆蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
产品特点:
1、 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、 将蛋白提取的时间缩短至30 分钟-1 小时。
3、 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4、 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. Western 实验内参可以选用Lamin A、Lamin B、TBP、Histon H3。
6. 更多蛋白提取常见问题分析等资料可以联系bestbio@163.com 索取。
细胞蛋白提取
1. 提取液制备:每200ul 冷的蛋白提取液A 和B 中分别各加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106 个细胞①,在4℃,500×g 条件下离心2-3 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5-10×106 中加入200μl 冷的提取液 A,高速涡旋振荡15 秒或吹打混匀,置冰上15 分钟,中间每隔5 分钟涡旋振荡或吹打混匀。
5. 再次高速涡旋振荡5 秒,然后在4℃,16000×g 条件下离心5 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS 洗涤一次,然后在4℃,16000×g 条件下离心5 分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入200μl②冷的提取液B,高速涡旋振荡15 秒。
9. 置冰上40 分钟,每隔10 分钟高速涡旋振荡15 秒。
10. 在4℃,16000×g 条件下离心10 分钟。
11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
注:
① 细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。
② 根据后面和蛋白浓度测定的情况,可调整使用量,一般在50-200ul。
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。
④ 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
组织蛋白提取
1. 提取液制备:每200ul 冷的蛋白提取液A 和B 中分别各加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆①至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5 分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃,500×g 条件下离心2-3 分钟,弃上清。
4. 每20ul 细胞压积中加入200μl 冷的提取液 A,高速涡旋振荡15 秒或吹打混匀,置冰上15 分钟,中间每隔5 分钟涡旋振荡或吹打混匀。
5. 再次高速涡旋振荡5 秒,然后在4℃,16000×g 条件下离心5 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS 洗涤一次,然后在4℃,16000×g 条件下离心5 分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入200μl 冷的提取液B,高速涡旋振荡15 秒。
9. 置冰上40 分钟,每隔10 分钟高速涡旋振荡15 秒。
10. 在4℃,16000×g 条件下离心10 分钟。
11. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
12. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注:
① 用液氮研磨的方法更佳,具体方法可以联系本公司bestbio@163.com 索取详细资料。
② 建议用BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
使用本产品发表的文献:
● Guang Yu, Tonghai Yan, Ye Feng et al. Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic
detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 (IF=6.189)
● Xiaohui Yan,Tianjiao Lyu,Nan Jia et al. Huaier Aqueous Extract Inhibits Ovarian Cancer
Cell Motility via the AKT/GSK3β/β-Catenin Pathway
PLoS ONE 2013 (IF=4.092)
● Jinchun Qian, Fengrong Jiang, Bin Wang et al. Ophiopogonin D prevents
H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 Volume 128, Issue 2, (IF=3.014)
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