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糖蛋白富集试剂盒

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产品编号
BB-3109
数量
-
+
1
产品描述

 

注:
● 蛋白裂解液: 含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。蛋白裂解液中含有蛋白酶抑制剂。
注意:
1、蛋白样品中不可含 EDTA。
2、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
3、每个柱的载量约为 1mg 糖蛋白。
储存条件:
2-8℃保存。蛋白柱室温避光保存。
有效期:
一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
我公司糖蛋白富集试剂盒可以选择性的对糖蛋白和多肽进行富集和纯化。本试剂盒可以用来提取富集哺乳动物细胞、组织、细菌、酵母、植物等样本的的糖蛋白。经本试剂盒制备的蛋白样品可用于Western blotting, mass spectrometry, 2D-PAGE和protein arrays 等下游应用。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 上样蛋白样品蛋白浓度在 0.25-0.5mg/ml。
4. 用蛋白柱进行糖蛋白富集,需要离心操作时将蛋白柱置于一个 50ml 离心管离心即可。
5. 最终蛋白样品用于 2D 电泳前需脱盐。
一、蛋白样品的准备:
以下为由细胞和组织制备蛋白样品的参考步骤,其它方法得到的蛋白样品稀释至蛋白浓度为0.25-0.5mg/ml 后直接上样即可。可以用试剂盒中的洗柱液、裂解液、洗涤液稀释蛋白样品。
细胞裂解:
1. 取 5-10×106 个细胞,在4℃,1000rpm 条件下离心5-10 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
2. 用冷生理盐水洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每 5×106个细胞中加入500ul 冷的蛋白裂解液,混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
4. 在 4℃,14000rpm 条件下离心15 分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白裂解液。
组织裂解:
1. 取 100mg 组织样本剪碎,加入总蛋白提取液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
2. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中,在4℃,10000rpm 条件下离心5 分钟。
3. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白裂解液。
植物蛋白提取:
1、取 200mg 植物组织样本,去除粗筋脉络等后剪碎,置于研钵中用液氮研磨。(没有液氮也可直接置冰上研磨即可)
2、研磨后加入 500ul 提取液,混匀后于一个预冷的干净离心管中在冰上静置2-3小时。
3、在 4℃,12000rpm 以上条件下离心10-15 分钟。
4、将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
二、柱平衡:
加入 500ul 洗柱液洗柱,重力作用下或4℃下1000g 力离心1 分钟甩干吸附柱。
三、上样:
将以上蛋白裂解液或其它待富集蛋白样品加入吸附柱,重力作用下或4℃下1000g力离心1 分钟甩干吸附柱。
四、洗柱:
加入 300ul 洗涤液洗柱,重力作用下或4℃下1000g 力离心1 分钟甩干吸附柱。重复两次。
五、洗脱:
加入 500ul 糖蛋白洗脱液,重力作用下或4℃下1000g 力离心1 分钟甩干吸附柱,收集洗脱液,即得到糖蛋白。
六、柱保存和柱再生:
糖蛋白纯化柱如果保存和处理得当的话可以多次重复使用。
使用后可以在柱中加入 20%乙醇溶液密封,置2-8℃保存。
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