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产品描述
注：
● 蛋白提取液： 含多种有效成分，可以充分释放细胞膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
● 蛋白酶抑制剂混合物：包含7种独立的蛋白酶抑制剂，AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin
A、Bestatin、E-64、EDTA。
注意：
1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件：
蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存；稀释液C 室温保存。
有效期：
一年。
注意事项：
● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 本试剂盒提取为细胞膜蛋白，需要提取细胞总膜蛋白请选择产品号为BB3103 的试剂盒，需要提取细胞核膜蛋白请选择产品号为BB3174 的试剂盒。
产品简介：
本公司细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白，提取的膜蛋白纯度高，不含核膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1 小时内完成。制备的膜蛋白保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于WesternBlotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
产品特点：
1、使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、将蛋白提取的时间缩短至30 分钟-1 小时。
3、含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4、紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、
丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器● 冰箱，冰盒
使用方法：
使用注意事项：
1. 提取液制备：每200ul 蛋白提取液A 和C 中分别加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106 个细胞①，在4℃，500×g 条件下离心2-3 分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 在细胞沉淀中加入200μl 冷的提取液A，高速涡旋振荡15 秒，置冰上20 分钟，中间涡旋振荡混匀2 次。
5. 再次高速涡旋振荡5 秒，然后在4℃，500×g 条件下离心3 分钟，弃沉淀。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，加入10ul 试剂B，充分混匀。
7. 37℃水浴10 分钟。
8. 在37℃ 1000×g 离心5 分钟。
9. 此时溶液分为两层，小心吸取分离出管底部大约20ul 液体。
10. 用适量稀释液C 稀释该溶液，即得膜蛋白样品。
11. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注：
① 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
② 建议用BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
使用本产品发表的部分新文献：
● Ge Zhao, Siyuan Li, Wei Zhao et al. Phage Display against Corneal Epithelial Cells
Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
PLoS ONE 2012 Volume 7, Issue 3, （IF=4.411）
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