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细胞膜蛋白提取试剂盒

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产品编号
BB-3116
数量
-
+
1
产品描述

注:

● 蛋白提取液: 含多种有效成分,可以充分释放细胞膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制剂混合物:包含7种独立的蛋白酶抑制剂,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin
A、Bestatin、E-64、EDTA。
注意:
1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件:
蛋白提取液2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存;稀释液C 室温保存。
有效期:
一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● 本试剂盒提取为细胞膜蛋白,需要提取细胞总膜蛋白请选择产品号为BB3103 的试剂盒,需要提取细胞核膜蛋白请选择产品号为BB3174 的试剂盒。
产品简介:
本公司细胞膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞样本中提取膜蛋白,提取的膜蛋白纯度高,不含核膜蛋白和胞浆蛋白。提取过程简单方便,可在1 小时内完成。制备的膜蛋白保持天然活性,而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于WesternBlotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
产品特点:
1、使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、将蛋白提取的时间缩短至30 分钟-1 小时。
3、含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4、紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、
丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
1. 提取液制备:每200ul 蛋白提取液A 和C 中分别加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106 个细胞①,在4℃,500×g 条件下离心2-3 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
3. 用冷PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 在细胞沉淀中加入200μl 冷的提取液A,高速涡旋振荡15 秒,置冰上20 分钟,中间涡旋振荡混匀2 次。
5. 再次高速涡旋振荡5 秒,然后在4℃,500×g 条件下离心3 分钟,弃沉淀。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管,加入10ul 试剂B,充分混匀。
7. 37℃水浴10 分钟。
8. 在37℃ 1000×g 离心5 分钟。
9. 此时溶液分为两层,小心吸取分离出管底部大约20ul 液体。
10. 用适量稀释液C 稀释该溶液,即得膜蛋白样品。
11. 将上述蛋白提取物定量②后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验③。
注:
① 细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。
② 建议用BCA 法进行蛋白定量。
③ 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
使用本产品发表的部分新文献:
● Ge Zhao, Siyuan Li, Wei Zhao et al. Phage Display against Corneal Epithelial Cells
Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
PLoS ONE 2012 Volume 7, Issue 3, (IF=4.411)
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