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组织线粒体蛋白提取试剂盒

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产品编号
BB-31711
数量
-
+
1
产品描述
储存条件:
线粒体试剂AB 于2-8℃保存,长期存放于-20℃保存;
蛋白裂解液C 室温保存;
蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
我公司线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种动物实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中提取线粒体蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝
少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
本试剂盒提取的蛋白不可用于2D 电泳。如下游实验需要用于2D 电泳,请使用货号BB-3191 的试剂盒。
产品特点:
1、使用方便,将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
2、含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
3、紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
4、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7 种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
●旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
●实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
●最好使用 Dounce 匀浆器匀浆,如果没有Dounce 匀浆器,用普通1ml 玻璃匀浆器匀浆也可。也可采用超声破碎的方法,建议功率30w,10s。采用普通匀浆器或超声破碎,建议镜检,保证细胞80%以上的破碎率。
1. 提取液准备:每 200ul 试剂C 中各加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物混匀备用。
2. 取 50-100mg 组织样本用剪刀尽可能剪碎。
3. 用冷 PBS 洗涤两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入 300μl 冷的试剂 A,置冰上10 分钟。
5. Dounce 匀浆器匀浆30-40 下,然后在4℃,500×g 条件下离心5 分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管。
7. 在 4℃,11000×g 以上条件下离心20 分钟。
8. 在沉淀中加入 300μl 冷的试剂B,混匀。
9. 在 4℃,11000×g 以上条件下离心20 分钟。。
10. 弃上清。
11. 在沉淀中加入 80ul-150ul 裂解液C,振荡20 分钟。(如无振荡条件,也可置冰上20 分钟,每隔5 分钟高速涡旋振荡15 秒。)
12. 即得线粒体蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
注:
① 建议用BCA 法进行蛋白定量。
② 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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