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膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒
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膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒

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产品编号
BB-3104
数量
-
+
1
产品描述

 

注:
● 蛋白酶抑制剂混合物:包含7种独立的蛋白酶抑制剂,AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin
A、Bestatin、E-64、EDTA。
注意:
1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
2、如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
储存条件:
蛋白酶抑制剂-20℃保存;磷酸酶抑制剂2-8℃保存;蛋白提取液2-8℃保存。
有效期:
一年。
注意事项:
● 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管
底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清
洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品简介:
我公司膜蛋白/胞浆蛋白/核蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中分步提取膜蛋白/胞浆蛋白/核蛋白。提取过程简单方便,可在1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
产品特点:
1、使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2、将蛋白提取的时间缩短至 30 分钟-1 小时。
3、含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4、紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5、蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备试剂和仪器
● 移液器、吸头 ● 离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ● 冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
蛋白提取步骤:
1. 提取液制备:每 400ul 冷的蛋白提取液A/B/D 中加入分别加入2ul 蛋白酶抑制剂混合物和2ul 磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取 5-10×106 个细胞①,在4℃,1000rpm 条件下离心5-10 分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,用细胞刮刀收集细胞。(组织样本50-100mg 剪碎,加冷PBS,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体(或用液氮研磨),冰上静置5 分钟,小心将匀浆吸入另一预冷的干净离心管。在4℃,500g 条件下离心2-3 分钟,弃上清。)
3. 用冷 PBS 洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每 5×106 个细胞中加入400ul 冷的蛋白提取液A,混匀后,在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞,使细胞完全破裂。
5. 在 4℃,1000g 条件下离心5 分钟。
6. 快速将上清(I)吸入另一预冷的干净离心管,在沉淀中加入200μl 冷的提取液
B,高速涡旋振荡15 秒。
7. 将混匀的提取液 B 置冰上40 分钟,每隔10 分钟高速涡旋振荡15 秒。
8. 在 4℃,16000×g 条件下离心10 分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。
9. 在步骤 6 中所得到的上清(I)中加入10ul 提取液C,充分混匀。37℃水浴10
分钟。
10. 37℃下② 1000g 离心3 分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),上层是胞浆蛋白部分,下层是膜蛋白部分约为40-50μl。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白。
12. 用 80-200μl 冰冷的提取液D 稀释步骤10 中的下层部分,即得膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量③后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验④。
注:
① 细胞数量根据实验情况调整,每次的裂解液用量并不是一定的,请根据实际情况调整。
② 必需保证在37℃左右下离心,至少确保30℃以上。无可控温的离心机时,用常温的离心
机在室温离心即可,适当缩短离心时间至2-3 分钟。
③ 建议用BCA 法进行蛋白定量。
④ 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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