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其他elisa试剂盒

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产品编号
BYE98202
数量
-
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1
产品描述

产品名称:牛新孢子虫病酶联免疫分析(ELISA)

本试剂仅供研究使用 
目的:本试剂盒用于检测羊血清,血浆及相关液体样本中牛新孢子虫病水平。
实验原理:
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)测定标本中牛新孢子虫病。用纯化的牛新孢子虫病抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中牛新孢子虫病相结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与HRP 标记的牛新孢子虫病抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与CUTOFF 值相比较,从而判定标本中牛新孢子虫病的存在与否。
试剂盒组成:
试剂盒组成 48孔配置  96孔配置     保存
说明书      1 份       1 份
封板膜   2 片(48)   2 片(96)
密封袋     1 个        1 个
酶标包被板 1×48      1×96      2-8℃保存
阴性对照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
阳性对照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1 瓶   6 ml×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
显色剂B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存
终止液     3ml×1 瓶  6ml×1 瓶  2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20 倍)×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶 2-8℃保存
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20 分钟,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1. 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液:将30(48T 的20 倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml 后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30 秒后弃去,如此重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
结果判定:
试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15
阴性判定:样品OD 值< 临界值(CUT OFF)者为牛新孢子虫病阴性
阳性判定:样品OD 值≥ 临界值(CUT OFF)者为牛新孢子虫病阳性
注意事项
1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。
2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物请避光保存。
6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm
7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M 的硫酸,使用时必须注意安全。
 
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
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